Conteo de microalgas



Cámara Sedgewick Rafter

El objetivo de contar algas no es sólamente establecer la población (densidad) de células por mililitro que hay en un recipiente, sino también determinar numéricamente el grado de división celular en un determinado tiempo. Los resultados permiten estimar en cierto modo la situación de un cultivo y relacionarlo con la curva de crecimiento de esa población algal.

Camara de Neubauer o Hemacitòmetro

El método empleado para contar algas es sencillo. Implica el uso de un dispositivo que permita el contaje. De todos los dispositivos conocidos el más usado en los laboratorios marinos comerciales de nuestro medio es el hemocitómetro. Para fines de investigación también se usa la cámara de Sedgwick-Rafter.



Por lo general estos dispositivos son bien usados para contar algas que se cultivan en recipientes, pero no necesariamente son muy convenientes para contar poblaciones naturales.Los métodos para estimar biomasa de algas de ambientes naturales generalmente requieren de la sedimentación del plancton.

 

Uso del hematocitómetro:

 

Coloque el cubreobjeto bien limpio sobre los pilares de soporte de la cámara. Usando una pipeta Pasteur que contiene la muestra de algas, en ángulo de 45 grados, deposite una gota en cada ranura del hemocitómetro para llenar el espacio. Es conveniente esperar por tres minutos antes de proceder al contaje en el microscopio,para dejar que las unidades algales se asienten debidamente. Use objetivos de 20X o 40X según cuál le sea más claro y cómodo para proceder.

Mantenga un orden en la secuencia del contaje para evitar errores de suma. No considere las células que estan asentadas justo en medio de cualquier línea de los cuadros, sean de las internas o de los laterales, aunque este criterio no se aplica cuando apenas es un 25% del cuerpo de la célula el que esté topando la línea.

Si la concentración es baja se contarán los cuadrantes 1, 2, 3 y 4 como se muestra en la figura:

Esquema 1

De lo contrario si la concentración celular es mas alta se contará el área central y si es posible se contarán los 25 cuadros centrales. Pero dado un caso si la cantidad de células encontradas en los 25 cuadros es demasiada, se contaran 5 de los 25 cuadros aleatoriamente o se optara por contar los cuadros del extremo y el cuadro central como se muestra en el siguiente esquema:



Parte central de la cámara de Neubauer

·      Concentración celular: es la cantidad de células de determinada especie de microalga en un mililitro de cultivo. Se hará utilizando la cámara de Neubauer. La fórmula a utilizar dependerá del lugar en la cámara de Neubauer que se emplee para contar.

 

#cel/ml= C x 10000

Donde:

C es el promedio de células contadas

_________________________________________________________________________

 

#cel/ml = Ct x 10000

Donde:

Ct corresponde a las células totales en los 25 cuadros centrales

_________________________________________________________________________

 

#cel/ml = Cc x 25 x 10000

Donde:

Cc será el promedio de los 5 cuadros contados

El 25 corresponderá a los cuatros centrales