AISLAMIENTO

Es necesario el aislamiento de una unidad algal y la colocación de la misma en un medio de cultivo adecuado para su multipliación, a fin de establecer un cultivo unialgal (monoespecífico). El término “unidad” se refiere a cualquier célula, colonia, filamento, pieza o parte del talo y cuerpo reproductivo. Un cultivo unialgal establecido es necesario para preparar un cultivo axénico.

De todos los métodos nombrados para aislamiento el de pipeta capilar y el de rayado en agar son los más empleados para este fin. Las algas menores a 10 μ difícilmente son aisladas con pipeta capilar. Filamentos pueden aislarse con pipeta capilar .

 

Pipeta capilar (simplificado)

La tapa de un plato Petri invertido se emplea como área para aislamiento:

 

a) Coloque de 10 a 15 gotas de una colección natural en el centro de la tapa invertida.

b) Coloque 8 gotas de un medio de cultivo adecuadoen 8 posiciones rodeando la colección natural. Marque primero con número la posición de cada gota por la cara interior de la tapa.

c) Usando una pipeta Pasteur nueva estirada y estéril, transfiera las algas deseadas de la colección natural a la gota número 1 del medio de cultivo.

d) Transfiera una sola alga desde la gota número 1 hasta la gota número 2.

e) Repita este proceso de transferencia con el resto de las gotas del medio de cultivo hasta asegurarse que una sola unidad algal requerida está presente en una gota.

f) Transfiera esta unidad algal a tubos de ensayos que contienen el medio de cultivo esterilizado. Como precaución, esta unidad algal en una gota puede ser transferida primero a un fragmento de un cubreobjeto que descansa en un portaobjeto, para examinarla con el microscopio compuesto. El fragmento con la gota y la unidad es entonces transferido al tubo de ensayo con el medio de cultivo para su desarrollo. De esta manera se asegura que una sola unidad algal es aislada y que efectivamente va al medio de cultivo.

g) Coloque los tubos bajo condiciones favorables para crecimiento.

 

 

Rayado en Agar

 

Este método brinda mayor facilidad para aislar algas de tamaño igual o menor a 10 μm de diámetro. También produce cultivos axénicos

a) Prepare cajas de Petri (vidrio o plástico) de 100 x 15 mm, conteniendo medio de cultivo solidificado con 1 a 1,5% de agar.

b) Coloque dos gotas de colección natural cerca de la periferia en el medio solidificado. Con el asa de platino (punta esterilizada sumergida en alcohol y quemada), bajo criterio de asepsia, rayar en paralelo la muestra de la colección en el agar.

c) Cubra el plato, inviertalo e incubar de 4 a 8 dias bajo adecuada condición de crecimiento.

d) Pasado este tiempo observar directamente en el estereomicroscopio el rayado y seleccione las colonias deseadas que están libres de otros organismos.

e) Remueva las colonias seleccionadas usando una pipeta Pasteur estirada estéril o el asa de platino y colóquelas en una gota de medio de cultivo estéril sobre un cubreobjeto. En un microscopio compuesto observe las unidades de algas deseadas y que sean de la misma especie.

f) Repita el procedimiento de rayado de una sola zona, constatar y nuevamente incubar para que se formen las colonias. Este segundo rayado reduce la contaminación por bacterias y asegura agrupaciones de unidades algales de la misma especie.



Esquema del cultivo en laboratorio

g) Transfiera las unidades algales de una colonia a un medio líquido (tubo de ensayo) o solidificado. Posteriormente podra realizar un cultivo prolongado. Tenga presente que cualqueir tipo de contaminación puede alterar el cultivo.

EL VOLUMEN DEL CULTIVO PUEDE VARIAR DE ACUERDO A SUS NECESIDADES AL IGUAL QUE EL TIEMPO DE CULTIVO DEPENDERA DE LA ESPECIE A CULTIVAR.